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人精子SP10蛋白检测试剂(胶体金法)
人精子SP10蛋白检测试剂(胶体金法)
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详细说明:

【预期用途】

本试剂适用于体外定性检测人精液中的精子SP10蛋白。根据【WHO人类精液实验室检验手册】(第五版)中提到,影响男性不育的主要因素有:精液量、精子总数、精子浓度、液化时间、精液PH值、精子正常形态率等,其中精子浓度检测就是衡量男性不育的一项重要指标。在该手册中,规定了精子浓度的正常最低值为15X106个/ml,当精子浓度少于15X106个/ml时,即认为有生育困难。但男性不育需要结合其它一些指标才能做出最终判断。基于若干解剖学、遗传学和生化特征,SP10蛋白被证实可选作精子浓度的分析物,其仅在睾丸中表达,是精子生成历程最后一步的分化标志物。据研究数据表明,SP10蛋白浓度与精子浓度呈一定的线性关系,即当精子浓度≥15X106个/ml时,SP10蛋白检测显示阳性。所以本试剂可用在辅助男性不孕不育的辅助诊断,同时为适龄夫妇提供生育指导。

【检测原理】

本试剂采用免疫层析双抗体夹心法原理和胶体金标记技术,是由固相有鼠抗人精子SP10蛋白单克隆抗体A(检测线,T线)和羊抗鼠IgG多克隆抗体(质控线,C线)的硝酸纤维膜、预先吸附有胶体金标记鼠抗人精子SP10蛋白单克隆抗体B(标记)的玻璃纤维以及其它辅料依次粘贴而制成。检测时,首先应使用样本稀释液对精液样本进行处理,将预处理后的样本溶液滴加在试剂样品垫加样区,在层析作用下沿着试条向前移动,样本处理液中含有的精子抗原(精子顶端体特异性蛋白SP10)与样品垫中预先固相的金标记鼠抗人精子SP10蛋白单克隆抗体B结合形成复合物,此复合物由于层析作用沿试纸条继续向前移动,则与结果显示窗口硝酸纤维素膜上检测线(T线)区预先固相的鼠抗人精子SP10蛋白单克隆抗体A形成“鼠抗人精子SP10蛋白单克隆抗体A – 精子抗原 -金标记鼠抗人精子SP10蛋白单克隆抗体B” 双抗体夹心复合物而凝聚,检出线(T线)区出现一条红色条带,则为阳性结果。如果待测样本中不含有精子SP10蛋白或精子浓度低于参考值下限,没有红色条带出现在检出线(T线)区,则为阴性结果。    无论待测样本中精子抗原浓度的多少,一条红色条带都会出现在质控线(C)区内。质控线(C)区内所显现的红色条带是判定是否有足够标本,层析过程是否正常的标准,同时也作为试剂的内控标准。若无质控线(C)出现,则实验结果无效。

主要组成成分

每袋试剂包含的试剂组分:

(1)测试条/卡 (主要由鼠抗人精子SP10蛋白单克隆抗体A、鼠抗人精子SP10蛋白单克隆抗体B、羊抗鼠IgG多克隆抗体、硝酸纤维膜、玻璃纤维、无纺纸、吸水纸、塑料片、胶带组成。):1条/袋;  

(2)干燥剂:1包/袋。

2.需要但不包含的试剂组分:  

(1)精液收集杯:1个/人份;  

(2)精液转移器(或者塑料滴管):1支/人份;  

(3)样本稀释管(含稀释液):1人份/瓶。

【储存条件及有效期】

(1)原包装应于2℃~35℃保存,不得冷冻。自检定合格之日起,有效期为24个月。

(2)原包装铝箔袋开封后,检测试纸应在1小时内使用。

【样本要求】

样本收集

(1)精液应收集在专用的精液收集容器,或者洁净的塑料容器中,瓶口不宜太小,否则,收集精液时容易遗漏。自备的容器,要洗刷干净并晾干。

(2)采用人工刺激(手淫)或其它方法取得精液标本,不得使用任何润滑液和洗液;或者使用专门为采集精液设计的无毒性避孕套进行精液采集,因为普通避孕套上的润滑液等可能影响检测结果。

(3)精液样本采集时间应为上次射精后至少2天、最长不超过7天时间后,这期间也不能有手淫、遗精等排精的情况。时间太短或太长都会影响测试的准确性。

(4)应当尽可能收集全部射出的精液,不得遗漏。如果确实有遗漏,对检测结果怀疑,应再次禁欲尽可能相同的天数收集精液进行检测,晨起采精最佳。性交中断排精法不能用于采集精液,因为射精最初部分可能丢失,而这部分精子浓度常常是最高的,同时不可避免混入阴道分泌物而影响检测结果的准确性。

(5)应尽量使用新鲜的精液样本进行检测(推荐3小时内进行检测),如要稍后重试,精液样本(密闭)需保存在2~8℃,但放置时间不要超过12小时。更长时间的保存应在-20℃及以下,但只能溶解一次。

2.样本预处理

(1)精液射到收集容器后很快会呈现典型的半固体凝胶团块,一般应室温放置30~60分钟,就会完全液化(即变得均质和较为稀薄,其中可能含有不液化的凝胶状团块为正常现象),很少超过60分钟或更长时间。如果60分钟仍未完全液化,应视为异常,建议2天后再次取样进行观察,如果仍然60分钟不能完全液化,应咨询专科医生。

只有完全液化的精液样本,才可以使用本试剂进行检测。

液化后的精液样本必须在原容器内充分混匀,但不能剧烈摇动。

(2)使用精液转移器吸取0.1毫升完全液化的精液,加入到含有样本稀释液(成分:0.1M 磷酸盐缓冲液PBS(PH7.4±0.2)+1%Tween-20)小管(1.9毫升/管)中,或使用试剂盒配套的一次性塑料滴管吸取精液标本,在含有样本稀释液小管中滴加3滴(35微升滴)。

备注:避免吸取精液中的胶状或粘性物质。

(3)盖紧样本稀释管的瓶帽,将精液和样本稀释液彻底混匀,即将样本处理管颠倒旋转至少5-10次,如果样本非常浓或者很有黏性,应当再次颠倒旋转10次,或者直接搅拌10-20秒,最后将含有精液的小管静置2分钟。

【检验方法】

卡型

(1)打开铝箔袋,取出检测试卡。

(2)将试卡放在水平的台面,拧开样本稀释管的顶帽,于试卡加样区中心缓慢滴加2滴预处理后的精液样本;或者用试剂盒配套的一次性塑料滴管吸取预处理后的精液样本,在试卡加样区中心缓慢滴加2滴。(备注:应避免气泡的加入)

(3)开始计时,应在5~10分钟内观察反应结果,20分钟后结果判断无效。

【检验结果的解释】

1.阴性(-)结果:出现一条红色条带,即仅质控线(C)区出现一条红色条带,检测线(T)没有红色条带出现。

2.阳性(+)结果出现两条红色线,即检测线(T)区和质控线(C)区均有红色条带。

3.无效结果:质控线(C)区没有红色条带出现,表明检验结果无效。在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并用新的试剂重新测试。如果问题仍然存在,应立即停止使用此批号产品,并与当地供应商和/或生产企业联系。

【检验方法的局限性】

1.本试剂仅用作通过检测精子SP10蛋白而评估精液中精子浓度,不能反映其生育能力。

2.本试剂不能用于确认父亲的身份,也不能用作避孕的指标。

3.本试剂作为体外定性检测精液样本中的精子SP10蛋白,来反映该样本中精子浓度是高于或低于参考值下限(1500万个/毫升),不能确定样本中准确的精子数量。

4.精子生成数目变化较大,不能仅凭一次检测结果做出判断。出现一次异常检测结果,应间隔1~2周后再采集样本检测,一般应复查2~3次。

5.本试剂检测结果为阴性,也不能证明不孕不育,因为10%有生育能力的男人,其精液中精子含量低于临界值。如对检测结果怀疑,建议重新取样进行检测,且两次采集的间隔应大于7天,但不能超过3周。如果仍为阴性,建议到医院咨询专科医生。

6.本试剂检测结果为阳性,不能就推断有生育能力,只能反映精液样本中精子浓度不低于1500万个/毫升,因为除精子浓度外,多种因素影响不孕不育。若夫妻双方性生活正常和没有采取任何避孕措施的情况下,有一年或更长时间没有怀孕,就应该咨询专科医生。

7.同所有的诊断试剂一样,最后的临床诊断不应当基于单一的实验室检测结果,必须由临床医生结合临床/体征和其它实验室检查做出最后的诊断。

8.在测试浓度水平,下列物质对本试剂检测结果不产生影响,它们是:1×107/mL大肠杆菌、1×107/mL淋病奈瑟氏菌、1×107/mL沙眼衣原体、20μg/mL睾丸素、20μg/mL雌二醇,以及全血10%,白细胞200X106个/毫升,唾液10%,尿液10%。

9.本试纸用于检测人精子SP10蛋白而评估精子浓度,标本出现钩状效应的最低浓度值为387百万个/mL。【产品性能指标】

1.最低检出限:用企业质控品进行检测,最低检出限的精子浓度应为15×106个/ml。

2.特异性:本试剂测试浓度为1000ng/mL前列腺特异性抗原(PSA)、1000ng/mL前列腺酸性磷酸酶(PAP)的特异性质控品,检测结果应为阴性。

3.阳性质控品符合率:用5份阳性质控品进行检测,符合率应为(+/+)5/5。4.重复性:用1份重复性质控品平行检测10次,检测结果应均应为阳性,且显色程度均一。

【注意事项】

1.本试剂为体外检测一次性使用,不能重复使用。

2.本试剂超过有效期、漏气或包装破损后不得使用。

3.不同的样本不能混合,同时不同批号的试剂样本稀释液不得混用。

4.采集不完整的精液标本不宜进行精液检查。

5.精液内可能含有乙型肝炎病毒/疱疹病毒和人类免疫缺陷病毒等,故精液应按具有潜在生物危害物质处理。

6.严格按照使用说明书操作,并在说明书要求的时间内观察和判断反应结果。7.使用前不能浸湿试条或触摸反应膜。在相对湿度较高的环境下使用时,应即开袋即检测,避免开袋后久置高湿环境引起试剂胶体金吸潮,造成检测结果偏差。

【参考文献】

1.《世界卫生组织人类精液及精子宫颈粘液相互作用实验室检验手册》(第4版)

2.世界卫生组织编。人类精液检查与处理实验室手册。5版.北京:人民卫生出版社,201l。

3.陈可 包华琼丁杰蔡敏.精子顶体酶活性与精液常规检查参数关系分析。中国医学创新,2011,8(14):8—10。

4.潘 云,唐任光,李北林.不育患者精浆酸性磷酸酶和前列腺特异抗原含量与精子质量的关系。检验医学与临床,2008,5(7): 390-391。

5.冯建芳 ,侯巧芳。精浆内PSA和ACP水平的变化与精液质量的关系。河南科技大学学报,2011,29(2):108-109。